Le requin citron vit principalement dans les plateaux continentaux et les récifs coralliens sans oublier les zones de mangroves. 
Il vit généralement en groupes sociaux jusqu’à 20 individus. On le retrouve géographiquement le long des caraïbes à l’Amérique latine ainsi que des deux côtés de l’Amérique centrale. On le retrouve aussi le long de la côte africaine côté Ouest. Une étude visant à comprendre la façon de chasser des requins citron juvéniles en utilisant leurs ouïes, publiée en 1972, s’est produite en Floride dans la baie de Biscaye où je cite « les requins étaient présents une grande partie de l’année ». Ce qui démontre qu’ils sont régulièrement dans ce territoire

Une expérience américaine pour connaître le positionnement des requins a été réalisée. Ils ont implanté par voie chirurgicale des émetteurs à ultrasons dans 38 requins citron (Negaprion brevirostris) et suivi manuellement les requins pendant 1 à 153 jours. Ils ont utilisé ces données de position avec les données de disponibilité de quatre variables environnementales (profondeur de l’eau, température, salinité et type de fonds), pour examiner l’utilisation de l’habitat. 

Par la suite, ils ont obtenu des résultats en décembre 1989. Tous les requins ont utilisé les contours de la profondeur de l’eau, de la température de l’eau et du type de fonds de manière disproportionnée par rapport à la disponibilité de ces variables sur le site d’étude. Plus précisément, les jeunes requins-citron ont choisi une eau moins profonde et plus chaude avec un substrat rocheux ou sableux sous-jacent, peut-être pour éviter les prédateurs. Il s’agit du premier rapport sur la sélection de l’habitat pour un élasmobranche.